PCR檢測因其高靈敏度、快速、操作方便等優勢已經被廣泛應用，不過正是由於它靈敏度極高，極微量的汙染源都有可能導致檢測結果的假陽性，因此，如何避免以及處理實驗室汙染，對PCR人來說是一門必修課。

廣東正一實驗裝備

實驗室汙染分類

樣本間交叉汙染

主要是在採（取）樣的過程中，由於取樣工具之間的交叉造成汙染；或者在核酸提取的過程中，由於移液器、離心管等使用不當導致的汙染。

PCR試劑的汙染

主要是在PCR試劑配製過程中，由於移液器、容器、陰性對照及其它試劑被核酸模板或陽性對照汙染。

克隆質粒的汙染

在實驗室操作中經常會用到陽性參考品，這些陽性參考品大多數是由某些克隆質粒製作而成，克隆質粒在單位容積內濃度高，不小心使用極易造成汙染。

PCR擴增產物汙染

這是PCR反應中最主要最常見的汙染問題。因為PCR產物複製量大，遠遠高於PCR檢測數個複製的極限，所以極微量的PCR產物汙染，就可造成假陽性結果。還有一種容易忽視，最可能造成PCR產物汙染的形式是氣溶膠汙染，在空氣與液體面摩擦時就可形成氣溶膠，據計算一個氣溶膠顆粒可含4。8萬複製，因而由其造成的汙染是一個值得特別重視的問題。

消除汙染的操作步驟

1.物料準備

（1）、購買噴壺（能夠噴出霧狀水汽的即可）；

（2）、購買市面上有效氯消毒片，根據要求配製不同濃度的消毒液，或者購買成品次氯酸鈉消毒液配製合適濃度消毒水；

（3）、購買核酸氣溶膠汙染清除劑（DNA AWAY®原液/MediClean®稀釋100倍）；

（4）、無紡布/無塵紙等。

2.處理方法

（1）、清理廢液缸並且對廢液缸用有效氯含量為2000mg/L消毒水浸泡消除核酸汙染；

（2）、用有效氯含量為2000mg/L消毒水對移液槍進行擦洗，關鍵部位為移液槍前端易汙染部位，清潔乾淨後用潔淨水再擦拭一遍；

（3）、將離心管架、擴增管架、擴增管架底板、吸嘴盒及其他相關物品用有效氯含量為500mg/L的消毒水浸泡2小時後，用清水沖洗乾淨晾乾後使用；

（4）、對汙染區域內的裝置如擴增儀、全自動提取儀等，使用核酸氣溶膠汙染清除劑進行反覆處理；對生物安全櫃等含有空氣過濾系統的裝置，需更換過濾網；

（5）、用有效氯含量為500mg/L的消毒液對整個實驗室（地板、牆面、天花板、門、窗戶等地方）進行清潔，並且用用有效氯含量為1000mg/L的消毒水對實驗室進行噴霧消毒（重點部位為操作區），有效降解空氣中的氣溶膠與附著在實驗臺表面的核酸汙染；同時加大通風量（內迴圈無用，儘可能外迴圈）；

（6）、待汙染區域及裝置器件清理完成後，常用裝置和操作檯面使用移動紫外消毒車近距離輻照1小時；實驗室內則使用室內紫外燈整晚輻照。

步驟（1）-（6）必須堅持每天進行，確保消除實驗室汙染；

3.汙染消除判斷標準

設計陰性對照組，根據陰性對照確認汙染情況。可使用敞開後隔夜放置操作區的陰性對照進行實驗（在單獨的實驗室驗證），若連續三天陰性對照沒有起跳，則說明汙染得到控制，可恢復正常實驗。

當然，為最大程度的降低可能出現的PCR汙染或杜絕汙染的出現，在實驗室前期設計及日常實驗室管理和操作中，就需要進行合理的規劃以及嚴格執行實驗室SOP，把汙染的可能性扼殺在搖籃中。